在操作酶聯免疫試劑盒實驗時，有很多技術問題是比較常見且易錯的，而就是這些問題困惑不少實驗操作員。小編根據技術部的問題處理總結，整理出了幾個比較常見的問題，跟著小編一起往下看吧：
一、為什么必須設置復孔？
為獲得更準確的實驗結果，強烈建議標準品及樣本進行復孔檢測，因為復孔檢測可以：計算平均值，確保實驗結果更準確；解決實驗中誤操作造成的跳孔現象；計算CV值，對實驗的操作和試劑盒的精密度進行評估。
如圖
二、重復性差怎么辦？
1.樣品數量不一，加樣時間長短不一(重復某一樣品時，加樣時間盡可能與di一次接近)。
2.酶標儀濾光片不對或輸入波長不對(TMB顯色用450/630波長)。
3.酶標儀測定重復性差(校對酶標儀)。
三、為什么標準曲線線性較差？
需要按照推薦方式保存標準品；溶解標準品之前需短暫離心，*收集粉末；確保標準品*溶解和混勻，然后再進行后續的系列稀釋步驟，確保每一步都充分混勻且移液；顯色的恰當終止；選擇合適的數學擬合方程繪制標準曲線。
四、為什么所有試劑和檢測樣本要平衡至室溫后再進行加樣操作？
溫度是ELISA結合反應的重要影響因素。為了使所有樣本在一致的溫度下反應，實驗前務必將所有試劑平衡至室溫，包括檢測樣本。避免因溫度的動力學反應差異而導致ELISA檢測結果的不準確。
