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PCR擴增儀的維護保養

   2021年12月16日 16:56  
  PCR擴增儀又稱為PCR基因擴增儀、PCR核酸擴增儀、聚合酶鏈反應核酸擴增儀,是利用PCR(Polymerase chain reaction,聚合酶鏈反應)技術對特定DNA擴增的一種儀器設備,被廣泛運用于醫學、生物學實驗室中,例如用于判斷檢體中是否會表現某遺傳疾病的圖譜、傳染病的診斷、基因復制以及親子鑒定等。
 
  PCR技術的原理類似于DNA的天然復制過程,其特異性依賴于靶序列兩端互補的寡核苷酸引物,由變性-退火-延伸三個基本反應步驟構成 。
 
  1. 模板DNA的變性
 
  模板DNA經加熱至93℃左右一定時間后,使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,以便它與引物結合,為下輪反應作準備。
 
  2. 模板DNA與引物的退火(復性)
 
  模板DNA經加熱變性成單鏈后,溫度降至55℃左右,引物與模板DNA單鏈互補序列配對結合。
 
  3. 引物的延伸
 
  DNA模板-引物結合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP為反應原料,靶序列為模板,按堿基配對與半保留復制原理,合成一條新的與模板DNA鏈互補的半保留復制鏈。
 
  重復循環變性-退火-延伸三過程,就可獲得更多的“半保留復制鏈”,而且這種新鏈又可成為下次循環的模板。每完成一輪循環需2~4分鐘,如此反復進行,每一輪循環所產生的DNA均能成為下一輪循環的模板,每一輪循環都使兩條人工合成的引物間的DNA特異區拷貝數擴增1倍,PCR產物以2的指數形式迅速擴增,經過25~30輪循環后(2~3小時),理論上可使基因擴增109倍以上,實際上一般可達106~107倍。
 
  隨著社會科技的發展,PCR儀基因擴增儀也越來越多的被應用到科研及臨床的基因擴增。雖然PCR儀基因擴增儀不是一種計量儀器,但其主要作用原理與基本計量要素密切相關,所以要求也是比較高,一旦失控,儀器將不能正常工作,所以對PCR儀基因擴增儀也是需要定期檢測和維護。
 
  那如何正確維護保養PCR儀基因擴增儀呢?首先PCR儀基因擴增儀需要定期檢測,視制冷方式而定一般半年至少一次。然后PCR反應的要求溫度與實際分布的反應溫度是不一致的,當檢測發現各孔平均溫度差偏離設置溫度大于1—2℃時,可以運用溫度修正法糾正PCR實際反應溫度差。當然PCR反應過程的關鍵是升、降溫過程的時間控制,要求越短越好,當PCR儀的降溫過程超過60s,就應該檢查儀器的制冷系統,對風冷制冷的PCR儀要較*地清理反應底座的灰塵;對其他制冷系統應檢查相關的制冷部件。
 
  最后,一般情況如能采用溫度修正法糾正儀器的溫度時,不要輕易打開或調整儀器的電子控制部件,必要時要請專業人員修理或利用儀器電子線路詳細圖紙進行維修。
 

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