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Lipid A與一般磷脂分子在結(jié)構(gòu)上有什么差別?
Lipid A是一種糖磷脂,它與一般磷脂分子在結(jié)構(gòu)上有所差別:①一般的磷脂僅連結(jié)兩個(gè)脂肪酸并且不具有雙糖結(jié)構(gòu),而Lipid A在D氨基葡萄糖雙糖骨架上連結(jié)多個(gè)脂肪酰殘基;② Lipid A含飽和或3-羥基脂肪酸,后者中的羥基可被飽和脂肪酸進(jìn)一步?;纬?/span>3-脂酰基脂肪酸,這是Lipid A的特-有成分;③Lipid A分子上的磷酸基團(tuán)可攜帶大量的負(fù)電荷,使LPS可與陽(yáng)離子發(fā)生強(qiáng)烈的相互作用,因而陽(yáng)離子對(duì)LPS的物理特性和生物學(xué)功能發(fā)揮顯著的影響。
當(dāng)用小牛血清白蛋白作為助溶劑時(shí);白蛋白與Lipid A形成的Lipid A白蛋白復(fù)合物可完-全溶于水,此復(fù)合物在真空干燥后仍可溶于水,這種溶解方法多年來(lái)被廣泛地用于Lipid A生物活性的研究。
Lipid A三乙胺或四乙胺鹽的溶解度較高,一般可達(dá)10~50mg/ml,真空干燥不影響其溶解度。Lipid A 三乙胺鹽的溶解度還取決于制備Lipid A時(shí)所用的水解方法。如果制備方法采用0.1mol/L HCl水解法,由于去除了Lipid A分子上酸敏感的1-磷酸,所形成的Lipid A即使經(jīng)電透析轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的三乙胺鹽亦極難溶解,故磷酸基的存在對(duì)于Lipid A的溶解性是至關(guān)重要的。如果采用2mol/L HCl,由于HCl能與LPS中的陽(yáng)離子快速且強(qiáng)烈地結(jié)合﹐在0℃的條件下作用幾分鐘后離心就可將Lipid A沉淀下來(lái),用雙蒸水多次洗滌,將上清液中的鹽去除后得到酸性的LipidA,再用三乙胺中和滴定,得到水溶性較高的Lipid A 三乙胺鹽。低濃度Lipid A鈉鹽具可溶性,但當(dāng)濃度增加到1mg/ml時(shí),Lipid A鈉鹽溶液的黏度就會(huì)顯著增加。Lipid A的鈣、鎂、腐胺鹽幾乎完-全不溶于水。由于LPS在強(qiáng)酸的條件下容易裂解成多糖和Lipid A,故強(qiáng)酸法不適合于LPS的去離子過(guò)程。
Lipid A是一種兩性分子,但雙糖骨架的親水性與脂肪酸的疏水性相比明顯較弱。因此,Lipid A與親水性的О-抗原及核心多糖分離后﹐游離的Lipid A水溶性降低,但可部分溶解于吡啶、三乙胺、二甲基亞礬等溶劑中。在溶解狀態(tài)時(shí),游離的Lipid A具有完整內(nèi)毒素的大部分毒性作用。
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