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動物細胞融合

來源: 上海喆圖科學儀器有限公司    2019年06月13日 13:06  

    細胞融合是指兩個或兩個以上的細胞合并成為一個細胞的過程。在自然情況下,體內和體外培養的細胞均能發生自發融合現象。人工方法誘導細胞融合開始于50 年,現在這項技術已成為研究細胞遺傳、細胞免疫,腫瘤及細胞工程的重要手段。在誘導物(如仙臺病毒,聚乙二醇)作用下,相互融合的細胞發生凝集,隨后在質膜接觸處發生質膜成份的一系列變化,主要是某些化學鍵的斷裂與重排,后打通兩質膜,形成雙核或多核細胞(此時稱同核體或異核體)。通過有絲分裂,細胞核便發生融合,形成雜種細胞。

 

實驗內容及方法

1. 用注射器取2ml Alsver 液,再從翼下靜脈取雞血2ml,注入試管內,再加6ml Alsver 液,混勻后置4℃冰箱中可備作3—4 天用。

2. 實驗時取“1”液1ml 于離心管中,加入4ml 0.85%的NaCl 液,混勻平衡后以1200r/min離心5 分鐘。

3. 去上清液。再重復“2”兩次,后一次離心10 分鐘。

4. 在沉降血球中加入1mlGKN 液,混勻使之成為細胞懸液。(可加GKN 液調節稀釋使每立方毫米含紅細胞3~4 萬個)。

5. 在“4”液中加入6—8 滴(約0.5ml)50%的PEG 液,迅速混勻,常溫下2~3min 滴片鏡檢。觀察時注意不同程度的融合現象。通常分為五個階段。①兩細胞膜接觸,粘連;②細胞膜形成穿孔;③兩細胞的細胞質連通;④通道擴大,兩細胞連成一體;⑤細胞*合并,形成一個含有兩個或多個核的圓形細胞。

6. 計算融合率。

 

實驗用品

1. 器具 顯微鏡 離心機 天平 離心管 水浴鍋 注射器 細滴管 載片、蓋片 

2. 試劑 50%聚乙二醇(PEG):稱取一定量的PEG(MW=4000)放入刻度試管,在水浴鍋中加熱溶化。待冷至50℃時,加入等體積并預熱至50℃的GKN 液混勻。

Alsver 液:葡萄糖2.05g 檸檬酸鈉0.8g NaCl 0.42g,加重蒸水至100ml。

GKN 液:NaCl 8g,KCl 0.4g,Na2HPO4·2H2O 1.77g,NaH2PO·2H2O 0.69g,葡萄糖2g,酚紅0.01g,溶于1000ml 重蒸水中。

0.85%NaCl 液

3. 材料 一齡公雞靜脈血

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