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古朵生物:怎么才能判斷*消化*?

來源: 上海古朵生物科技有限公司    2020年03月24日 15:26  
  胞培養實驗中*的除了培養基,*也是非常重要的一個角色,雖然細胞培養試驗基本技術大同小異,每種細胞的培養條件各不相同,但是,在細胞傳代過程中都少不了這個步驟—*消化。
 
  細胞消化使用*時需要了解哪些問題?
 
  一、 細胞培養過程中為什么要使用*呢?*的作用是什么?
 
  *是一種蛋白酶,酶切位點是肽鏈的Lys或Arg兩個殘基的羧基端肽鏈,通過在特定位置上降解蛋白,使細胞膜上與培養皿壁結合處蛋白降解,從而使兩者分離。這時,細胞由于自身內部細胞骨架的張力以及培養液表面張力可成為球形。
 
圖1.*酶切位點
 
  二、 使用胎牛血清培養細胞,在使用*消化時發現血清可以終止此過程,這是何原因?
 
  血清終止的原理其實是競爭抑制,就是用過量的牛血清中含有的蛋白和*結合,使*失去消化細胞蛋白的機會。
 
  三、 為什么使用了*消化,細胞還是成團的,這可能是什么原因導致的?
 
  ① 消化時間不夠 ② 吹打力度不夠 ③ *消化液濃度不夠 ④ 細胞密度過高之后才消化傳代 ⑤ *存儲不當,或者使用了過期*
 
  四、 *分裝凍存時要注意什么?
 
  *分裝時盡量分裝成多瓶,并遵守3次左右用完和只裝2/3體積的原則。因為冷凍保存時體積會膨脹,多次使用同一瓶*反復凍融會降低消化效果并增大污染的可能性。
 
  五、 怎么才能判斷*消化*?
 
  注意:不是細胞全部成間隔分布很離散的單個圓形才表示消化好了。
 
  一般肉眼觀察貼壁細胞層,只要能移動了,多半呈沙狀移動就可以了,就應該停止消化。
 
  六、 *適用于哪些細胞消化?它的消化效果與哪些有關呢?
 
  *適用于消化細胞間質較少的軟組織和傳代細胞,如胚胎、上皮、肝、腎等組織,但對纖維性組織和較硬的癌組織效果較差。*的消化效果主要與pH值、溫度、*濃度、組織塊大小和硬度有關。
 
  七、 *中的酚紅有哪些作用?
 
  酚紅在培養基中被用來作為pH指示劑,中性時為紅色,酸性時為黃色,堿性時為紫色。研究表明:酚紅可以模擬固醇類激素(特別是雌激素)的作用。為避免固醇類反應,培養細胞尤其是哺乳類細胞時,建議用不含酚紅的培養基。由于酚紅干擾檢測,在做流式細胞檢測時,也會使用不含酚紅的培養基或者*。
 
圖 2. Phenol red test
 
  八、 在做細胞凋亡檢測時,細胞為什么不能用含有EDTA的*消化?
 
  Annexin V(膜聯蛋白)是Ca2+依賴的蛋白,EDTA會螯合Ca2+從而影響Annexin V,進而影響結果,因此需選用不含EDTA的*。建議放入培養箱中進行消化,時間可以長一點。隨時觀察細胞情況,避免消化過度;也可使用細胞刮刀將細胞刮下,后用槍吹勻,比消化簡單,還可避免使用*帶來的傷害。

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