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　　細胞名稱人胸腺激酶缺陷細胞；143BTK-

　　形態特性上皮細胞樣

　　生長特性貼壁生長

　　特征特性143B細胞是一株人的胸腺激酶缺陷細胞系，由WistarInstitute制備，為美國專，利細胞系，僅可作為研究用，不能用于商業目的。

　　培養條件DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS

　　傳代方法1:3傳代,2-3天傳一代

　　傳代情況C97

　　凍存條件基礎培養基+5%DMSO+20%FBS

　　支原體檢測陰性

　　STRSTR鑒定

　　同工酶

　　染色體

　　使用權限A類

　　參考文獻

　　細胞培養步驟

　　一．培養基及培養凍存條件準備：

　　1）準備DMEM培養基（含NaHCO31.5g/L；GIBCO,貨號12800017，添加NaHCO31.5g/L)；優質胎牛血清，10%；L-glutamine(推薦gibco貨號：35050-061)，2mM；雙抗，1%；（可在*培養基中加入最，大耐藥濃度18ug/ml的GEM)

　　2）細胞在傳代和剛復蘇時較為脆弱，中止液須為不含GEM的*培養基，且在細胞未貼壁期間和貼壁前期需用不含GEM的*培養基，待細胞生長狀態穩定時再根據需要濃度添加GEM。

　　3）若細胞生長狀態較為緩慢時，可適當降低GEM的濃度，或使用不含GEM的*培養基培養至細胞生長狀態較好時，再更換為所需的GEM濃度。

　　4）培養條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。

　　5）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

　　二．細胞處理：

　　1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

　　2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

　　1.棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

　　2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。