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zl-056583 人腦星形膠質母細胞瘤細胞U-87MG/U87MG

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  細胞介紹


  該細胞系由PontenJ等建立,源于惡性神經膠質瘤。裸鼠皮下接種可成瘤。


  細胞特性


  1)來源:神經膠質瘤


  2)形態:上皮樣,貼壁細胞


  3)含量:>1x106細胞數


  4)規格:T25瓶或者1mL凍存管包裝


  5)用途:僅供科研使用。


  運輸和保存:干冰運輸及復蘇好存活細胞:(1)1mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇,若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯系。(2)T25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨,收到后按照細胞接收后的處理方法操作。


  細胞接收后的處理:


  1)收到細胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h,若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯系我們。


  2)請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態,同時給剛收到的細胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時細胞狀態的依據。


  3)貼壁細胞:細胞在37℃培養箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況,有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下,可去除培養瓶中灌液培養基(若有未貼壁的細胞需要離心回收,重懸打入到原培養瓶中),加入新配制的*培養基6-8mL,放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長密度達70%-80%以上,可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中,若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。


  4)備注:運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞,請換用按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基來培養細胞。收到細胞后第,一次傳代建


  議T25培養瓶1:2傳代。


  一.培養基及培養凍存條件準備:


  1)準備MEM培養基;優質胎牛血清,10%;2mML-谷,氨,酰,胺;NEAA1%雙抗,1%。


  注意事項:培養細胞的過程中細胞會發生堆疊和松散貼壁的細胞團這是正常的。需要2-3天對細胞進行一次換液以保證細胞的正常生長。該細胞貼壁較慢,復蘇細胞后48h內盡量不要移動細胞讓細胞達到最,佳的貼壁狀態。生長過程中會懸浮細胞出現,在換液和傳代過程中需要離心回收懸浮的細胞。丟棄懸浮的細胞會使細胞的密度變低,這個細胞在培養過程中不會達到100  %的融合。細胞生長過密會引起貼壁的細胞變成懸浮的狀態。明膠或多聚賴氨酸包被的培養瓶可以使細胞更好的貼壁。


  2)培養條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。


  3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配。


  二.細胞處理:


  1)凍存細胞的復蘇:


  將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL*培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,*培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml*培養基的培養瓶(或皿)中37℃培養過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。


  2)細胞傳代:如果細胞密度達70%-90%,即可進行傳代培養。該細胞輕微貼壁和懸浮培養的細胞,傳代可以參考以下方法:


  1.收集:將培養瓶中的懸浮的細胞收集到離心管中。用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。由于細胞貼壁不牢PBS潤洗后細胞會脫落所以PBS也要回收到離心管中。


  2.加入0.25%(w/v)胰,蛋,白,酶-0.53mMEDTA于培養瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL)置于37℃培養箱中消化1-2分鐘(難消化的胞可以適當延長消化時間),然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來終止消化。


  3.將收集到的懸浮細胞、pbs清洗液中的細胞和消化下來的貼壁細胞以1000rpml離心5min,棄去上清,補加1-2mL培養液后重懸混勻后將細胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養基以保持細胞的生長活力,后續傳代根據實際情況1:2~1:5的比例進行。


  3)細胞凍存:收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。下面T25瓶為例;


  1.細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中,可使用血球計數板計數,來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細胞/ml.2.1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞,按每1ml凍存液含1×10


  6~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中,標注好名稱、代數、日期等信息。


  3.將要凍存的細胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。


  注意事項:


  1.所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。


  2.建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意:凍存管浸沒在液氮中會泄漏,并會慢慢充滿液氮。解凍時,液氮轉化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子,從而產生飛揚的碎屑造成人員傷害。



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